
实验概念:免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
实验步骤:
1、细胞准备 对单层生长细胞,在传代培养时,将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中,待细胞接近长成单层后取出盖玻片,PBS洗两次:对悬浮生长细胞,取对数生长细胞,用PBS心洗(1000rpm,5min)2次,用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片
2、固定 根据需要选择适当的固定剂固定细胞。固定完毕后的细胞可置于含叠氮纳的PBS中4℃保存3个月。PBS洗涤3x5 min。
3、通透 使用交联剂(如多聚甲醛)固定后的细胞,一般需要在加入抗体孵育前,对细胞进行通透处理,以保证抗体能够到达抗原位。选择通透剂应充分考虑抗原蛋白的性质。通透的时间一般在5-15min.通透后用PBS洗涤3x5 min.
4、封闭 使用封闭液对细胞进行封闭,时间一般为30min.
5、一抗结合 室温孵育1h或者4℃C过夜。PBST漂洗3次,每次冲洗5min.
6、二抗结合 间接免疫荧光需要使用二抗。室温避光孵育1h.PBST漂洗3次,每次冲洗5min后,再用蒸馏水漂洗次
7、封片及检测 滴加封片剂一滴,封片,荧光显微镜检查。
套餐内容:包埋+切片2片+染色2片+抗体费+拍照
*抗体费需要根据抗体库中是否有该抗体而定
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